仪器设施信息

仪器名称

实时荧光定量PCR仪

仪器型号

LightCycler® 480 II

生产厂家

Roche

设备配置与技术指标

高分辨率：轻松区分1000与2000拷贝浓度差异

高灵敏度：可检测单拷贝基因

温度均一性：±0.1℃

动力学范围广：可同时检测到1-1010

高重复性：重复性高，CV＜0.15%

高速：40分钟完成40个PCR循环(384孔板)

技术领先：采用Therma-BaseTM热循环技术(专利号US Patent No.5161609)、导热性能好的银质热循环模块和先进的光学检测系统，彻底消除边缘效应，保持稳定优质的检测结果，且整个过程中无需使用ROX等内参染料，有效节约成本

全能：分析模式多样，绝对定量、相对定量、基因分型(熔解曲线法及终点法)、高分辨率熔解曲线分析，同时适用市面上主流的检测模式(染料检测、水解探针(TaqMan®探针)、杂交探针、简单探针等)

开放式平台：可使用市面上绝大多数常见荧光染料以及第三方提供的8连管、96孔板和384孔板

主要功能

1. 可以通过PCR循环过程中实时荧光采集和软件分析进行定量和基因型的分析。

2. 适用于多种检测模式，包括：非序列依赖的探针模式（SYBR Green I或其他饱和荧光染料序列特异的探针模式（Taqman水解探针模式，杂交探针模式，简单探针模式，分子信标，Scorpions等模式）通过高分辨率熔解曲线分析（HRM）进行基因扫描突变检测，产物分型和SNP研究。

服务项目

1. SNP（单核苷酸多态性）的筛查。

2. 基因突变扫描，包括缺失、重复、点突变。

3. 新突变的筛查。 

4. DNA甲基化的筛查。

5. HLA基因组配型、等位基因频率分析、物种鉴定、品种鉴定。 

6. 法医学鉴定、亲子鉴定。  

7. 动植物品质相关多态性位点的研究。

8. 植物特定特性，突变与性状关联性研究。

9. 遗传育种中特定突变的筛查、未知突变的发现。

10. 疾病相关易感基因的高通量筛查

11. RNA编辑

12. CRISPER/Cas9 打靶效率验证

所属技术平台

通用平台

放置地点

5-301平台检测室

平台负责人

黄正辉

仪器管理员

郝圆园

管理员联系方式

yyhao@ipsnanjing.cn

预约使用链接

设备预约联系方式:孙老师 13512502861

注意事项

1. 在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在总RNA的提取过程中，注意避免mRNA断裂。

2. 为了防止非特异性扩增，必须设阴性对照。

3. 内参的设定：主要为了用于靶RNA的定量。常用的内参有GADPH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)、β-Actin(β-肌动蛋白)等。其目的在于避免RNA定量误差、加样误差以及各PCR反应体系中扩增效率不均一各孔间的温度差等所造成的误差。

4. PCR不能进入平台期，出现平台效应与所扩增的目的基因的长度、序列、二级结构以及目标DNA起始的数量有关。故对于每一个目标序列出现平台效应的循环数，均应通过单独实验来确定。

5. 防止DNA的污染：采用DNA酶处理RNA样品，在可能的情况下，将PCR引物置于基因的不同外显子，以消除基因和mRNA的共线性。